ПОЛУЧЕНИЕ РЕКОМБИНАНТНОГО ТРАНСМЕМБРАННОГО ДОМЕНА БЕЛКА-ПРЕДШЕСТВЕННИКА АМИЛОИДА, АССОЦИИРОВАННОГО С БОЛЕЗНЬЮ АЛЬЦГЕЙМЕРА

© 2009 г. О. В. Бочарова^#, К. Д. Надеждин, Э. В. Бочаров, А. С. Арсеньев

^#Тел.: (495) 330-74-83*127; факс: (495) 335-50-33; e-mail: o.bocharova@gmail.com

Учреждение Российской академии наук Институт биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997 ГСП, Москва В-437, ул. Миклухо-Маклая, 16/10

Поступила в редакцию 07.05.2009 г. Принята к печати 17.06.2009 г.

Более половины мутаций мембранного белка амилоидного предшественника (amyloid precursor protein – APP), обнаруженных при семейных формах болезни Альцгеймера, приходится на его трансмембранный (ТМ) домен. Патогенные мутации, как предполагают, влияют на латеральную димеризацию ТМ-домена АРР в мембране, изменяя конформацию димера и/или его стабильность, что вызывает альтернативное расщепление АРР в мембране и в итоге появление нейротоксичного амилоидного бета-пептида. Для детального исследования специфических белок-белковых и белок-липидных взаимодействий ТМ-домена была создана конструкция для получения рекомбинантного белка в E. coli. Рекомбинантный белок содержит ТМ-домен APP (APPtm(686–726)) с прилегающими внемембранными N- и C-концевыми участками. Отработана методика получения изотопно-меченных белков в количествах, необходимых для структурно-динамических исследований с помощью гетероядерной ЯМР-спектроскопии. На основе спектров ¹H-¹⁵N-HSQC подобраны условия солюбилизации APPtm(686–726) в детергентных мицеллах и липидных бицеллах, имитирующих бислойную мембрану.

Ключевые слова: болезнь Альцгеймера; белок-предшественник амилоида; трансмембранный домен; ЯМР-спектроскопия.

Биоорг.химия 2010, 36 (1): 105-111