ПОСТТРАНСЛЯЦИОННЫЕ РЕАКЦИИ, ПРИВОДЯЩИЕ К СМЕЩЕНИЮ СПЕКТРОВ БЕЛКА asFP595 ИЗ Anemonia sulcata В ДЛИННОВОЛНОВУЮ ОБЛАСТЬ

© 2010 г. А. А. Пахомов, Ю. А. Третьякова, В. И. Мартынов^#

^#Тел.: (495) 336-51-11; e-mail: vimart@list.ru

Учреждение Российской академии наук Институт биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997 ГСП, Москва, В-437, ул. Миклухо-Маклая, 16/10

Поступила в редакцию 30.04.2009 г. Принята к печати 02.06.2009 г.

В большинстве флуоресцентных белков, характеризующихся поглощением и эмиссией света в красной и дальне-красной области спектра (550–650 нм), расширение π-системы хромофора осуществляется за счет дополнительного окисления GFP-подобной структуры и образования ацилиминного заместителя. В отличие от этих белков, ацилимин в хромофоре фотоактивируемого белка asFP595 заменен на кето-группу. В настоящей работе изучены реакции, приводящие к батохромному сдвигу в спектре asFP595. Анализ кинетики созревания показал, что аналогично другим красным флуоресцентным белкам на промежуточной стадии образуется незрелая форма, содержащая протонированный хромофор (поглощение при 420 нм), которая изобестически превращается в конечную зрелую форму (568 нм). Масс-спектрометрический анализ хромопептида, выделенного из незрелого asFP595, показал, что промежуточная форма содержит хромофор GFP-типа. Также установлено, что в ходе окисления GFP-хромофора происходит выделение эквимольного количества пероксида водорода. Для анализа промежуточных продуктов реакции окисления был проведен мутагенез первого хромофоробразующего остатка. Показано, что во всех изученных мутантах синтез хромофора не останавливается на стадии ацилиминного производного, а приводит сразу к фрагментации основной цепи белка и образованию кето-формы.

Ключевые слова: DsRed; фотоактивируемый белок; Anemonia sulcata; флуоресцентные белки; ацилимин; asFP595; хромофор.

Биоорг.химия 2010, 36 (1): 117-121