МЕТОД ПОЛУЧЕНИЯ АДЪЮВАНТНО АКТИВНЫХ ПЕПТИДОВ – МИМЕТИКОВ GMDP С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ И КОМБИНАТОРНЫХ БИБЛИОТЕК ПЕПТИДОВ В ФОРМАТЕ ФАГОВОГО ДИСПЛЕЯ

© 2010 г. А. Г. Ламан*, А. О. Шепеляковская*, Х. М. Бозиев*, Г. В. Савинов*^,**, Ф. А. Бровко*^#_, В. А. Несмеянов***

^#Тел.: (4967) 73-08-53; e-mail: brovko@fibkh.serpukhov.su

*Филиал Института биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 142290, Пущино, Московская обл., проспект Науки, 6;
**Филиал МГУ им. М.В. Ломоносова в г. Пущино, Пущино, Московская обл.;
***Учреждение РАН Институт биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, Москва

Поступила в редакцию 02.06.2009 г. Принята к печати 09.07.2009 г.

Описан метод получения пептидов – миметиков GMDP, потенциально обладающих адъювантной активностью, но без отрицательных эффектов, присущих GMDP. Для поиска пептидов, обладающих адъювантной активностью GMDP были использованы высокоспецифичные моноклональные антитела против GMDP и пептидные комбинаторные библиотеки в формате фагового дисплея. При иммуноаффинном обогащении библиотек для получения высокоаффинных и специфичных пептидов применяли различные методы элюции. При элюции фаговых частиц с иммуносорбента 1 мкМ раствором природного лиганда – GMDP, был получен единственный пептид структуры Arg-Val-Pro-Pro-Arg-Tyr-His-Ala-Lis-Ile-Ser-Pro-Met-Val-Asn (RN). При использовании для элюции буфера с низким значением рН (0.1 М глицин-HCl, рН 2.2) были выделены два пептида: Ser-Gly-Arg-Val-Ala-Val-Ser-Pro-Asp-Ser-Pro-Leu-Phe-Tyr-Pro (SP) и Arg-Tyr-Gly-Gly-Ser-Val-Leu-Asn-Ile-Glu-Cys-Gln-Phe-Tyr-Gly (RG). Константы аффинности для пептидов RN и SP составляли 3.6 х 10⁸ и 3.5 х 10⁸ М^-1 соответственно. Специфичность взаимодействия с моноклональными антителами проверяли с помощью конкурентного вытеснения пептидов из комплекса антиген–антитело с помощью GMDP. Пептид RN обладал адъювантной активностью, сходной с адъювантной активностью GMDP, но не проявлял пирогенного эффекта, присущего GMDP. Метод может быть использован для поиска миметиков биологически активных низкомолекулярных соединений.

Ключевые слова: пептиды-миметики; адъюванты; GMDP–MDP, фаговый дисплей.

Биоорг.химия 2010, 36 (2): 170-177