МИКРО- И НАНОЧАСТИЦЫ ИЗ КОНДЕНСИРОВАННОЙ ДНК, ОБРАЗУЮЩИЕСЯ В ПЦР С ГЕНОМНЫМИ ДНК ДРОЖЖЕЙ В КАЧЕСТВЕ МАТРИЦЫ. ДАННЫЕ ЭЛЕКТРОННОЙ МИКРОСКОПИИ

© 2010 г. В. Н. Данилевич^#, В. А. Кадыков, Е. В. Гришин

^#Тел.: (495) 336-40-22; e-mail: dan@mail.ibch.ru

Учреждение Российской академии наук Институт биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997 ГСП, Москва, В-437, ул. Миклухо-Маклая, 16/10

Поступила в редакцию 15.05.2009 г. Принята к печати 19.10. 2009 г.

Ранее было найдено, что в ПЦР с геномной ДНК дрожжей в качестве матрицы в присутствии KlenTaq-полимеразы образуются микрочастицы из конденсированной ДНК. В настоящей работе продолжено исследование таких микрочастиц с помощью электронной микроскопии. Показано, что наряду со стандартными электронно-плотными микросферами образуются также микросферы небольшой электронной плотности, у которых частично или полностью отсутствуют шипы. В исследованных образцах обнаружены различного типа наночастицы: нанофиламенты, точечные электронно-поглощающие частицы (наноточки), а также компактные наночастицы (наночешуйки) различной формы и размера. Обнаружено, что увеличение числа циклов ПЦР выше оптимального приводит к резкому возрастанию количества наночастиц в ПЦР-смеси. Исследованы образцы суспензий микрочастиц после их непродолжительного (5 мин) нагрева при 94^оС. В прогретых образцах достоверно зафиксировано частичное плавление микросфер – они теряют часть ДНК и уменьшаются в размере, одновременно появляется множество сгустков из нанофиламентов. Изучено действие нуклеазы S1 на ДНК микросфер. Обсуждаются молекулярные механизмы формирования микро- и наночастиц.

Ключевые слова: полимеразная цепная реакция, KlenTaq-полимераза, геномная ДНК дрожжей, конденсация ДНК, ДНК-микросферы, ДНК-наночастицы, ДНК-нанофиламенты, электронная микроскопия, УФ-спектроскопия.