ВЫДЕЛЕНИЕ ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО ИНТЕРФЕРОНА β1b (Ser17), ЭКСПРЕССИРОВАННОГО В E. coli, С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ИОНООБМЕННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

© 2011 г. В. П. Романов**, В. В. Безуглов*, М. Ю. Бобров*, Т. И. Костромина*, С. А. Феофанов**^#, А. И. Мирошников*

^#E-mail: feo@fibkh.serpukhov.su

*Учреждение Российской академии наук Институт биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, Москва;
**Филиал учреждения Российской академии наук Институт биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 142290, Московская обл., Пущино, просп. Науки, 6

Поступила в редакцию 04.08.2010 г. Принята к печати 16.12.2010 г.

Представлена методика выделения интерферона β1b (Ser17) из телец включения, включающая следующие стадии: растворение и восстановление белка из телец включения, ренатурацию, хроматографию на DEAE-сефарозе, хроматографию на SP-сефарозе, концентрирование раствора белка, обессоливание и добавление стабилизаторов. Ренатурацию осуществляли разбавлением раствора восстановленного белка буферным раствором рН 8.0, содержащим 50 мМ Трис-HCl, 25 мкМ CuCl₂, 0.5% Твин-20. Элюцию интерферона β1b с катионообменной колонки проводили в градиенте рН (9.3–11.3) натрий-фосфатного буфера. Элюат концентрировали, обессоливали на колонке с сефадексом G-50 в 1 мМ NaOH, добавляли маннит, а затем фосфат натрия для нейтрализации раствора белка. Препарат гомогенен по результатам гель-электрофореза и ВЭЖХ и обладает антипролиферативной активностью, практически одинаковой с активностью известного препарата «Бетаферон», взятого в качестве эталона. Таким образом, показана возможность получения очищенного и активного интерферона β ионообменной хроматографией в присутствии неионного детергента Твин-20. С нашей точки зрения, предложенная методика перспективна для масштабирования и использования в промышленных масштабах.

Ключевые слова: интерферон β рекомбинантный; ренатурация; выделение белка; ионообменная хроматография; ВЭЖХ.