КОЛИЧЕСТВЕННОЕ СРАВНЕНИЕ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ ПРИ ИХ СОЕДИНЕНИИ С ПОМОЩЬЮ IRES ИЛИ КОДИРУЮЩЕЙ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ 2А-ПЕПТИДА ТЕШОВИРУСА СВИНЕЙ В БИЦИСТРОННОМ ВЕКТОРЕ

© 2013 г. А. И. Кузьмич^#, А. В. Введенский, Е. П. Копанцев, Т. В. Виноградова

^#Тел.: +7 (495) 330-69-92; факс +7 (495) 330-46-54-38; e-mail: akrubik@gmail.com

ФГБУН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук, Москва, 117997, ул. Миклухо-Маклая, 16/10

Поступила в редакцию 15.01.2012 г. Принята к печати 29.01.2013 г.

В биотехнологии часто требуется осуществить одновременную экспрессию нескольких целевых генов. С этой целью активно разрабатываются мультицистронные векторы, кодирующие несколько белков. Наиболее часто в коммерчески доступных векторах такого типа используют различные варианты внутреннего сайта посадки рибосом вируса энцефаломиокардита (IRES EMCV). Однако многие исследователи считают более перспективным использование бицистронных векторов на основе последовательностей, кодирующих саморасщепляющиеся 2А-пептиды. В работе проведено сравнение эффективности экспрессии генов в клеткаx, трансфицированных бицистронными векторами на основе IRES EMCV или нуклеотидной P2A-последовательности, соответствующей 2А-пептиду тешовируса-1 свиней. Эффективность экспрессии определена в трёх клеточных линиях млекопитающих посредством измерения уровня коэкспрессии генов, кодирующих флуоресцентные белки RFP и EGFP, связанных друг с другом через IRES или P2A-последовательность. Более высокий уровень экспрессии трансгенов обнаруживался в клетках, трансфицированных генетической конструкцией на основе P2A-последовательности.

Ключевые слова: бицистронный вектор, IRES, EMCV, 2А-пептид, тешовирус свиней.

Биоорг.химия 2013, 39 (4): 454-465