По материалам доклада на VII Всероссийской конференции “Протеолитические ферменты: структура, функции, эволюция” (30 июня – 4 июля 2014 года, г. Петрозаводск)

ИЗУЧЕНИЕ ПЕРВИЧНОЙ СПЕЦИФИЧНОСТИ ПРОТЕИНАЗ СТАТИСТИЧЕСКИМ АНАЛИЗОМ МАЛДИ МАСС-СПЕКТРОВ ПРОДУКТОВ ПРОТЕОЛИЗА

© 2015 г. Н. Л. Еремеев^#, А. В. Борзенкова

^#Тел.: +7 (495) 939-34-17, факс: +7 (495) 939-54-17; e-mail: eremeev@enzyme.chem.msu.ru

Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, Химический факультет, 119991, Москва, Ленинские Горы, 1, стр. 3

Поступила в редакцию 09.06.2014 г. Принята к печати 22.07.2014 г.

Проведена экспериментальная верификация метода изучения первичной специфичности протеолитических ферментов статистическим анализом масс продуктов протеолиза белковых субстратов на протеиназах с известной субстратной специфичностью (глутамилэндопептидаза и трипсин). Предлагаемый метод не требует прямого определения аминокислотной последовательности продуктов протеолиза, достоверно определяет протеиназы с узкой субстратной специфичностью и относительно толерантен к наличию в МАЛДИ масс-спектрах продуктов протеолиза пиков посторонних загрязнений. Показано, что для исключения ложноположительных результатов необходимо использовать набор белковых субстратов с последующим усреднением получаемых статистических данных.

Ключевые слова: протеолитические ферменты, первичная специфичность, матрично активированная лазерная десорбция-ионизация (МАЛДИ), масс-спектрометрия.