ИДЕНТИФИКАЦИЯ 2',3'-cGMP КАК ИНТЕРМЕДИАТА КАТАЛИТИЧЕСКОГО РАСЩЕПЛЕНИЯ РНК БИНАЗОЙ И ОЦЕНКА ЕГО БИОЛОГИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ

© 2015 г. Ю. В. Сокуренко*, П. В. Зеленихин*^{, #}, В. В. Ульянова*, А. И. Колпаков*, Д. Мюллер**, О. Н. Ильинская*

^#Тел.: +7 (843) 233-78-84; факс: +7 (843) 233-78-14; e-mail: pasha_mic@mail.ru

*Казанский (Приволжский) федеральный университет, 420008, Республика Татарстан, Казань, ул. Кремлевская, 18;
**Institute for Anatomy and Cell Biology Justus-Liebig-University, 35385 Giessen, Germany

Поступила в редакцию 05.05.2014 г. Принята к печати 03.07.2014 г.

Биназа – РНКаза Bacillus pumilus (ранее B. intermedius) – эндонуклеаза, которая деполимеризует РНК, расщепляя 3',5'-фосфодиэфирную связь между гуанозин-3'-фосфатом и 5'-ОН-группой соседнего нуклеотида с образованием 2',3'-гуанозинциклофосфатов в первом этапе каталитической реакции. Последующий гидролиз образующихся 2',3'-сGMP до 3'-фосфата высокоспецифичен и осуществляется медленно, в связи с чем возникает вопрос о времени существования данного позиционного изомера при каталитическом расщеплении РНК биназой и о его вкладе в противоопухолевую активность последней. В настоящей работе с помощью иммуноферментного анализа установлено, что при расщеплении РНК биназой 2',3'-сGMP сохраняется в реакционной смеси в течение часа, при этом действие фосфодиэстраз не приводит к полной его элиминации. Количество 2',3'-сGMP максимально при рН 8.5 и достигает наномолярных концентраций при исходной концентрации РНК 100–1000 мкг/мл. Экзогенный 2',3'-сGMP, как и его позиционный изомер 3',5'-сGMP, не вызывают апоптоз клеток аденокарциномы легких человека А549, подверженных апоптогенному действию биназы. Учитывая данные об интернализации биназы и активации открытия митохондриальных пор 2',3'-гуанозинциклофосфатами, можно предположить, что в апоптоз, индуцированный биназой, 2',3'-cGMP способен внести вклад только при внутриклеточном его образовании.

Ключевые слова: циклизующие гуанилспецифичные РНКазы, биназа, 2',3'-сGMP, карцинома легких человека А549.