ВЛИЯНИЕ УСЛОВИЙ ЭКСПРЕССИИ РЕКОМБИНАНТНОЙ ФОСФОЛИПАЗЫ А₁ ИЗ НАРУЖНОЙ МЕМБРАНЫ YERSINIA PSEUDOTUBERCULOSIS НА СТРУКТУРУ И СВОЙСТВА ТЕЛЕЦ ВКЛЮЧЕНИЯ

© 2018 г. С. И. Бахолдина^1,*, Е. В. Сидорин¹, В. А. Хоменко¹, М. П. Исаева¹, Н. Ю. Ким¹, Е. П. Быстрицкая¹, Е. А. Пименова², Т. Ф. Соловьева¹

*Факс: +7 (423) 231–4050; эл. почта: sibakh@mail.ru

¹Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Г. Б. Елякова ДВО РАН, 690022, Владивосток, просп. 100 лет Владивостоку, 159;
²Национальный научный центр морской биологии ДВО РАН, 690041, г. Владивосток, ул. Пальчевского, д. 17

Принята к печати 07.11.2017 г. Поступила в редакцию 11.10.2017 г.

DOI: 10.7868/S0132342318020070

Изучено влияние концентрации индуктора (IPTG) и времени индукции при температуре 37°C на гетерологический синтез в виде телец включения (ТВ) зрелого мембранного белка фосфолипазы А₁ (PldA) Yersinia pseudotuberculosis, а также на физико-химические и структурные характеристики ТВ. С помощью электронной микроскопии, динамического светорассеяния, оптической спектроскопии для ТВ были определены размер, форма, стабильность (растворимость в мочевине и детергентах, устойчивость к протеолизу), вторичная структура белка ТВ и наличие амилоидных структур. Было установлено, что ТВ имеют близкую к сферической форму и шероховатую поверхность, расщепляются протеиназой К и содержат белок с упорядоченной вторичной структурой. Белок ТВ имеет упорядоченную вторичную структуру с высоким содержанием β-структуры. С увеличением концентрации индуктора и времени экспрессии конформация рекомбинантного белка в ТВ изменяется в сторону менее нативной, на что указывает увеличение стабильности ТВ и уменьшение ферментативной активности белка. При растворении ТВ в 0.06% SDS и в 5 M мочевине рекомбинантный белок сохраняет вторичную структуру в частично модифицированном виде, и добавление цвиттер-ионного детергента в мицеллярной концентрации не трансформирует конформацию белка в нативную.

Ключевые слова: Yersinia pseudotuberculosis мембранная фосфолипаза А₁, рекомбинантная, тельца включения, структурная организация.

Биоорг. химия 2018, 44 (2): 163-174